Trüpsiniseerimine on rakkude dissotsiatsiooniprotsess, mille käigus kasutatakse trüpsiini, proteolüütilist ensüümi, mis lagundab valke, et eraldada kleepunud rakud anumast, milles neid kasvatatakse. Rakukultuurile lisamisel lagundab trüpsiin valgud, mis võimaldavad rakkudel veresoone külge kinnituda.
Miks me rakke trüpsiinime?
Trüpsiinimist tehakse sageli selleks, et võimaldada rakkude liikumist uude anumasse, katsetamiseks jälgimist või kolvis liitumisastme vähendamist, eemaldades teatud protsendi lahtrid.
Kuidas trüpsiin rakke eraldab?
Trüpsiin/EDTA on kombineeritud meetod rakkude eraldamiseks. Trüpsiin lõikab adhesioonivalke raku-raku ja raku-maatriksi interaktsioonides, lõigates adhesioonvalkude aminohappe spetsiifiliselt lüsiini või aginiini C-terminalis, kui ülesvoolu aminohapeei ole proliin.
Kuidas saada trüpsiinitud adherentseid rakke?
Protseduur
- Eemaldage sööde kultuurinõust aspireerimise teel ja peske monokihti soolalahusega, mis ei sisalda Ca2+ ja Mg 2+, et eemaldada kõik seerumi jäljed. …
- Jagage kultiveerimisnõu(de)sse piisav alt trüpsiini või trüpsiini/EDTA lahust, et katta täielikult rakkude monokiht, ja asetage 37 °C inkubaatorisse ~2 minutiks.
Kuidas trüpsiini rakukultuuris keelata?
Kui lahtrid kuvatakse eemaldatuna, lisage 2 köideteelsoojendatud täielikku kasvukeskkonda, et inaktiveerida trüpsiini. Dispergeerige sööde õrn alt, pipeteerides mitu korda üle rakukihi pinna, et tagada >95% rakkude taastumine. Seerumivabade kultuuride puhul sojaoa trüpsiini inhibiitor (toote nr