Esiteks jätavad nii EcoR1 kui ka Xba1 DNA seedimisel 5' üleulatuvad osad (nagu ka Nde1). Mõlemal juhul on 3' ots süvistatud, mistõttu võib polüermaas lisada aluseid. Teiseks saavad kõik polümeraasid lisada aluseid ainult 3'-otsa, nii et Klenow lisab 4 alust mõlema koha taandunud 3'-otsa, et luua tömbid otsad.
Kas restriktsiooniensüümid jätavad 5 fosfaati?
Restriktsiooniensüümidega lõhustatud vektorid ja insertid sisaldavad vajalikke terminaalseid modifikatsioone (5' fosfaat ja 3' hüdroksüül), samas kui polümeraasi ahelreaktsiooni (PCR) abil loodud fragmendid ei pruugi.
Kas tömbid otsad saab ligeerida?
Nüri otsaga ligeerimine
Nüri otsa ligeerimine ei hõlma väljaulatuvate otste aluspaarimist, seega mis tahes tömbi otsa võib ligeerida teise tömbi otsaga. Nüri otsad võivad tekitada restriktsiooniensüümid, nagu SmaI ja EcoRV.
Kas Taq polümeraas tekitab tömpe otsad?
Jah… Taq Polymerase lisab A-üleulatuvad osad, kui hoiate PCR-is viimase pikendamisetapi 72 dC juures. Enamasti kasutatakse TA kloonimiseks.
Miks kasutada DNA sekveneerimisel Klenowi fragmenti?
Klenowi fragment on äärmiselt kasulik selliste uurimispõhiste ülesannete jaoks nagu: Kaheahelalise DNA süntees üheahelalistest mallidest . DNA fragmentide taandunud 3' otste täitmine, et muuta 5' üleulatuv osa nüriks . Eemendavate 3-tolliste väljaulatuvate osade seedimine.
