Kui rakud on eraldunud, lisage trüpsiini inaktiveerimiseks 2 mahtu eelsoojendatud täielikku kasvukeskkonda. Dispergeerige sööde õrn alt, pipeteerides mitu korda üle rakukihi pinna, et tagada >95% rakkude taastumine.
Kuidas trüpsiini aktiivsust peatada?
Trüpsiini seedimise saab peatada külmutamisega või reaktsiooni pH alandamisega alla pH 4, lisades sipelg-, äädik- või trifluoroäädikhapet (trüpsiin taastab aktiivsuse, kui pH tõstetakse üle pH 4). Seeditud proove võib säilitada -20°C juures.
Mis neutraliseerib trüpsiini?
Puhvri k altsiumi- ja magneesiumiioone sisaldav aeglustab samuti trüpsiini aktiivsust. FBS on aga tõhusam viis trüpsiini aktiivsuse pärssimiseks.
Kas seerum inaktiveerib trüpsiini?
Seerum inaktiveerib neerude ensümaatilisest seedimisest järelejäänud trüpsiinijäägid ja seejärel rakkude poolt sünteesitud proteolüütilised ensüümid. Värskelt trüpsiiniga töödeldud rakke võib seerumi puudumisel kasvatada monokihtidena, eeldusel, et neid trüpsiinijääkide eemaldamiseks pestakse korduv alt.
Kui palju meediat kulub trüpsiini desaktiveerimiseks?
Seni kui kasutate vähem alt 1:1 vahekorras 5-10% seerumit sisaldavat söödet koos trüpsiiniga, peaks inhibeerimine olema enam kui piisav, millele järgneb tsentrifuugimine ja söötme vahetamine värske söötmega.
