Saate oma proovi soolast eemaldada ka ultrafiltrimise teel 1 kümnendikuni eelmisest mahust, mis lahjendab uuesti ja kordab UF-etappi. Parim soola eemaldamise meetod on soolastamine geelfiltratsiooniga 50 mM puhvri vastu, kui ultrafiltreerimine (klassikaline, mitte tsentrifugaalne).
Mis on soolade eemaldamine valgu puhastamisel?
Soola eemaldamist kasutatakse soolade eemaldamiseks valgulahustest, fenooli või inkorporeerimata nukleotiidide eemaldamiseks nukleiinhapetest või liigsete ristsiduvate või märgistusreaktiivide eemaldamiseks konjugeeritud valkudest.
Kuidas te valke puhastate?
Valkude hulgipuhastamisel on tavaline esimene samm valkude eraldamiseks sadestamine ammooniumsulfaadiga (NH4) 2SO4. Selleks lisatakse suurenevaid koguseid ammooniumsulfaati ja kogutakse kokku sadestunud valgu erinevad fraktsioonid. Seejärel saab ammooniumsulfaadi eemaldada dialüüsi abil.
Kuidas puhverdate vahetusvalke?
Puhvri vahetus teostatakse aga esm alt tasakaalustades kolonni vaiguga koos puhvriga, millesse proov peaks sattuma. Mõlemal juhul viiakse proovi kandvad puhvri koostisosad kolonn asendatakse lahusega, millega kolonn on eelnev alt tasakaalustatud.
Millist järgmistest kromatograafiameetoditest saab kasutada valkude soola eemaldamiseks?
Nagu eespool mainitud, saab geelfiltratsiooni tõhus alt kasutada valkude tootmisekssoola eemaldamine ja see saavutatakse geelfiltratsioonikolonni esm alt veega tasakaalustamisega. Kuid puhvri vahetamine saavutatakse esm alt kolonni vaigu tasakaalustamisega sihtpuhvriga.
