Mida suurem on molekulmass, seda pikem on mähis ja seda aeglasem alt liigub molekul. Niisiis, elektroforees + SDS eraldub molekulmassi, mitte natiivse laengu alusel. Oluline märkus: sama pikkusega valke ei saa tavaliselt geelelektroforeesi ja SDS-i abil eraldada.
Kuidas eraldada sama molekulmassiga valke?
Tsentrifuugimine, elektroforees ja kromatograafia on kõige levinumad meetodid valkude puhastamiseks ja analüüsimiseks. Tsentrifuugimisel eraldatakse valgud nende settimiskiiruse alusel, mida mõjutavad nende mass ja kuju.
Millised tehnikad eraldavad valgud laengu alusel?
Valke saab nende netolaengu alusel eraldada ioonvahetuskromatograafiaga. Kui valgul on positiivne puhaslaeng pH 7 juures, seostub see tavaliselt karboksülaatrühmi sisaldava helmeste kolonniga, samas kui negatiivselt laetud valk mitte (joonis 4.4).
Milline järgmistest tehnikatest sobib kõige paremini valkude eraldamiseks molekulmassi alusel?
Jagamisel põhinevad kromatograafiameetodid on väga tõhusad väikeste molekulide kui aminohapete, süsivesikute ja rasvhapete eraldamisel ja tuvastamisel. Kuid afiinsuskromatograafia (st ioonivahetuskromatograafia) on makromolekulide kui nukleiinhapete ja valkude eraldamisel tõhusam.
Mis tüüpi veergkromatograafia eraldab valgud molekulmassi alusel?
Geelfiltratsiooni (GF) kromatograafia eraldab valgud üksnes molekuli suuruse alusel. Eraldamine saavutatakse poorse maatriksi abil, millele molekulidel on steerilistel põhjustel erinev ligipääs – st väiksematel molekulidel on parem juurdepääs ja suuremad molekulid jäetakse maatriksist välja.
